Magyarázat: Miért negatív a több Covid-tünetben szenvedő ember tesztje?
Sok Covid-19-tünetben szenvedő ember tesztje negatív. Számos valószínű oka van, mint például a vírus mutációi, amelyek elkerülik a kimutatást, a mintavétel és a tesztelés minősége, valamint az RT-PCR készletek hatékonysága.
A tesztek különböző szakaszokban hibázhatnak, a rossz mintagyűjtéstől és -tárolástól kezdve a hibás extrakcióig és amplifikációig. (Expressz fotó: Vishal Srivastav) Miközben India nehezen tud megbirkózni az RT-PCR-tesztek iránti példátlan kereslettel, a jelentések arra utalnak, hogy a tüneteket mutató Covid-19-betegek akár 20%-ának is negatív a tesztje.
A hamis negatív eredmények nyilvánvaló tendenciája megtagadhatja a súlyos betegek kórházi felvételét és kritikus ellátását, miközben hagyja, hogy a tünetmentesek mozogjanak és elterjesszék a vírust. A tendencia arra késztette a szakértőket, köztük az AIIMS igazgatóját, Dr. Randeep Guleriat, hogy a Covid-19 kezelést ajánlják mindenkinek, aki klasszikus tüneteket mutat, függetlenül az RT-PCR eredményétől.
Hírlevél| Kattintson ide, hogy a nap legjobb magyarázóit megtalálja a postaládájában
Miért hamis negatívok?
Az RT-PCR tesztek, amelyek a Covid-19 diagnózisában az arany standardnak számítanak, nem tökéletesek. Az Indiai Orvosi Kutatási Tanács (ICMR) által az RT-PCR teszt validálásához megkövetelt minimális érzékenység (pozitívak kimutatásának képessége) 95%. Ez azt jelenti, hogy akár 5%-os hamis negatív eredmény várható.
Míg anekdotikus jelentések azt sugallják, hogy a hamis negatív eredmények aránya Indiában növekszik, még nincs tanulmány, amely ezt alátámasztaná.
Elméletileg négy tág tényező határozza meg az RT-PCR teszt pontosságát: a személy vírusterhelése, a mintagyűjtés és -feldolgozás minősége, magának a tesztkészletnek a hatékonysága, valamint a teszt értelmezésének mércéje.
VÍRUSTERHELÉS: A Covid-19 jellemzően a fertőzési ciklus ötödik napjára jelentkezik megfelelően. Az expozíció utáni tesztelés során a fertőzött személy Covid-negatívnak bizonyulhat. Lehet, hogy ez nem fő tényező a közelmúltban tapasztalható téves negatív tendencia mögött, mivel bizonyos Covid-19 mutánsok nyilvánvalóan korai tüneteket mutatnak.
Számos olyan tünetet mutató betegnél, akiknél az RT-PCR vizsgálatok álnegatívnak bizonyultak, ezt követően Covid-pozitívnak bizonyultak a Bronchoalveolaris Lavage (BAL) tesztek során, amelyek az alsó légutakból bronchoszkópon keresztül mintákat gyűjtenek. Ez olyan feltételezésekhez vezetett, hogy bizonyos mutánsok megkerülik a felső légutakat, hogy megcélozzák a tüdőt – ez a forgatókönyv megtagadhatja az orrüregből és a torokból vett mintán alapuló RT-PCR-tesztet, ami a pontos eredményhez szükséges vírusterhelést jelenti.
KAPACITÁS ROBBANÁS: A Covid tesztlaboratóriumok száma Indiában a 2020 februári 14-ről 2021 áprilisára több mint 2400-ra nőtt. Egy ilyen gyors bővüléshez több száz laboratórium engedélyezésére volt szükség az RT-PCR tesztelésére, és több ezer technikus kiképzésére volt szükség.
Biztonsági okokból az ICMR 2020 júliusában 30 minőségellenőrző laboratóriumot sorolt fel, hogy ellenőrizze az általa jóváhagyott összes Covid-laboratóriumot. Azóta további 8 minőségellenőrző labort adtunk hozzá. A három állam több laboratóriumában működő források azonban azt mondták, hogy csak néhány létesítmény és műszer ellenőrzésére került sor.
Ideális esetben a pozitív és negatív minták keverékét véletlenszerűen kell felvenni minden laboratóriumból időszakonként újbóli vizsgálat céljából. Megtörtént valaha? Igen. Ezt következetesen csinálták? Nem – mondta egy ICMR intézet tudósa, aki nem jogosult a médiával beszélni.
Az ICMR és számos minőségellenőrzési laboratórium hallgatott, amelyet 2020 júliusa óta a laboratóriumi időszakos megfigyelés és a minőségi megfelelőségi adatok tekintetében közelítettek meg.
EMBERI ELEM: A tesztek különböző szakaszokban hibázhatnak – a rossz mintagyűjtéstől és tárolástól a hibás extrakcióig és amplifikációig. Minden RT-PCR készlet tartalmaz egy belső kontrollt (IC), amely megvédi az olyan forgatókönyvet, amikor nem nyerik ki/amplifikálják az RNS-t, ami álnegatív eredményhez vezet. Az IC lehet exogén vagy endogén. Exogén, ha az RNS extrakció előtt minden mintához mesterséges RNS-templátmolekulát adnak. A teszt érvénytelennek minősül, ha a szintetikus RNS-t az extrakció után nem mutatják ki, és újbóli vizsgálatot írnak elő. És egy endogén kontroll egy, a mintában jelenlévő emberi „háztartási” gént használ; ha az RNS extrakciós eljárást követően nem észleli, érvényteleníti a tesztet.
Egy emberi házőrző gén is biztosítja a minta minőségét… De az indiai piacon az RT-PCR készletek több mint 75%-a olcsóbb külső belső kontrollokat használ – mondta egy mumbai székhelyű molekuláris biológus.
Az ICMR 2020. áprilisi SOP-ja az RT-PCR-ről megállapította, hogy az extrakció exogén kontrollja figyelmen kívül hagyható, mivel az nem tükrözi a begyűjtött minta minőségét. Azt javasolta, hogy különálló RNáz P-t vagy bármely más emberi házőrző gént… párhuzamosan futtassunk egy külön csőben… (a begyűjtött minta minőségének és az extrakciós eljárás ellenőrzésére).
2020 májusában az ICMR/HLL által az RT-PCR készletekre kiírt megatender hasonló követelményeket írt elő. Számos gyártó azzal érvelt, hogy a különböző vállalatok különböző belső ellenőrzéseket alkalmaznak, beleértve az exogéneket is, amelyeket a szabályozó ügynökségek, például az FDA és a CEIVD hagytak jóvá, és hogy a háztartási géneken alapuló kedvezőtlen szelekció elriasztja a tisztességes versenyt. Végül a pályázatot felülvizsgálták, hogy mind az endogén, mind az exogén belső ellenőrzési lehetőségeket tartalmazza.
VÍRUS MUTACIÓ: Az RTR-PCR teszt egy vagy több vírusgén meghatározott területét/területeit célozza meg annak kimutatására. A teszt hamis negatív eredményt adhat, ha a vizsgált genom szegmensében mutáció lép fel. A több genetikai célpontot használó teszteket, például az Indiában használtakat, kevésbé valószínű, hogy becsapják a mutációk.
A szabályozó hatóságok, például az Egyesült Államok FDA-ja, rendszeresen figyelemmel kísérik a mutációk hatását az RT-PCR-tesztekre. Miközben olyan szakértők, mint Dr. Rakesh Mishra, a Hyderabad's Cellular and Molecular Biology (CCMB) igazgatója, úgy érzik, az ICMR-nek hasonló gyakorlatot kellene kezdeményeznie, de lehet, hogy nem könnyen nyomon követhető valós időben több mint 200 RT-PCR készlet, amelyet Indiában hagytak jóvá a kialakuló mutációk ellen.
Egyrészt egyetlen gyártó sem hozta nyilvánosságra (vagy nem fogja) nyilvánosságra hozni a tesztjei által megcélzott részletes sorozatokat. Miközben az ICMR-hez benyújtották validálásra, csak a célgéneket említik, a primerszekvenciát nem – mondta az Egészségügyi Minisztérium egyik vezető kutatója.
Mindeddig azonban meglehetõsen magabiztosnak érezhetjük magunkat a valós idejű hatékonyságellenõrzés hiányában is. Eddig a Covid-19 variánsok főként S gén (tüskeprotein) mutációkkal rendelkeznek. Az itt található készletek többsége a célpontok konzervált (változatlan) régióit használja – mondta Dr. Shanta Dutta, a kolera- és bélbetegségek nemzeti intézetének (NICED) igazgatója.
Árzuhanás
Egy év alatt az RT-PCR készlet ára több mint 1100 Rs-ról 40 Rs alá esett. Az importvám-mentesség 2020 októberi visszavonása óta a legtöbb külföldi márka elhagyta az indiai piacot a további 15%-os költségteher miatt. Számos indiai márka is megtagadta a 100 Rs alatti eladást. Sokan találtak olyan elkötelezett vállalati ügyfeleket, akik nem bánják, hogy egy kis pluszt fizetnek a minőség biztosítása érdekében. Néhányan több PCR készletet is kínálnak különböző árszinteken.
Bár ezt senki nem mondja ki, sokan megkérdőjelezik az olcsóbb verseny minőségét. Az ellenvélemény az, hogy a piacon elérhető minden tesztkészlet megfelel az ICMR érvényesítési referenciaértékeinek, és minden árháború végső soron a fogyasztó hasznára válik.
Ennek ellenére nem mindenki győzött meg. A laboratóriumi vizsgálat költségének megfelelő csökkenése 4500 Rs-ról 800 Rs-ra. Ezen kívül, aki ellátogat a helyi laboratóriumba Covid-teszt céljából, tudja, hogy melyik készletet használják? Hány labor fog 100 Rs-t költeni, ha megússza a 40 Rs-készletet? – mondta az egyik első indiai Covid PCR készlet gyártó.
CSATLAKOZZ MOST :Az Express Explained Telegram csatorna
A Ct érték
Az RT-PCR teszt amplifikálja a mintából kivont nukleinsavat a Covid-19 vírusra specifikus nukleinsav kimutatására. Az erősítés küszöbérték (Ct) értékű ciklusokban történik. Nyilvánvaló, hogy minél nagyobb a vírus jelenléte/terhelése, annál alacsonyabb a Ct-érték vagy az amplifikációs ciklusok száma, amelyek szükségesek ahhoz, hogy kimutatható legyen.
Az ICMR a Ct értéket 35-re állította a negatív eredményekhez. Ezen túlmenően a potenciálisan jelenlévő vírus nyomai elhanyagolhatónak minősülnek, és a minta Covid-negatívnak minősül.
De bizonyos államok, mint például Maharashtra, megpróbálták kiterjeszteni az elfogadhatóság határát 24-es Ct-érték javaslatával. Mivel ez potenciálisan nagyszámú embert kizárna, akinek mennyiségileg alacsonyabb, de klinikailag jelentős vírusterhelése van, az ICMR megismételte álláspontját a 35-ös Ct-értékkel kapcsolatban. .
Azonban kevés az egyértelműség, ha minden állam ugyanazt a Ct-referenciaértéket követi. Legalább két több államból álló laboratóriumi hálózat vezető tisztségviselői szerint egymásnak ellentmondó és időnként indokolatlan szóbeli utasításokat kaptak az ilyen tesztparaméterekre vonatkozóan. Még a molekuláris teszt sem mentes a szubjektív torzítástól.
Oszd Meg A Barátaiddal:
